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<div class="csl-entry">Herzog, H. (2012). <i>Development of a colorimetric protein array for the detection of sepsis</i> [Diploma Thesis, Technische Universität Wien]. reposiTUm. https://resolver.obvsg.at/urn:nbn:at:at-ubtuw:1-60601</div>
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In dieser Arbeit wird ein Multiplex-Immunoassay für die einfache und kostengünstige Quantifizierung von C-reaktivem Protein (CRP), Interleukin-8 (IL-8) und S-100 präsentiert, welcher auf kolorimetrischer Detektion und Auslesung mit Digitalkamera basiert.<br />Glas modifiziert mit Epoxy-Polymer (SU-8), Nitrozellulose und Polyvinylidenfluorid (PVDF) wurden mit Fänger Antikörpern für IL-8 und S-100, sowie mit dem Antigen CRP bespottet. Die Detektion und Quantifizierung der Biomarker im Serum wurde durch Immunreaktionen mit biotinylierten Detektionsantikörpern und Streptavidin, gebunden an entweder Gold Nanopartikel, Alkaliner Phosphatase oder Meerrettichperoxidase, durchgeführt. Die gebundenen Goldnanopartikel wurden durch Silberfärbung sichtbar gemacht. Das Auslesen erfolgte mit Clondiag ArrayMate oder einer Digitalkamera.<br />Die Ergebnisse zeigen, dass das zu bevorzugende Chipmaterial sehr stark von der gewünschten Detektionsart abhängt: nicht transparente Chipoberflächen zeigen höheren Kontrast und sind daher für die kolorimetrische Detektion besser geeignet als transparente Materialien.<br />Die Sensitivität der kolorimetrischen Methode (Detektionslimits: 0,01 ng/mL für S-100; 1,34 pg/mL für IL-8; 3,00 µg/mL für CRP) war ähnlich der des auf Fluoreszenz basierenden Chip, was darauf hindeutet, dass die kolorimetrische Detektionsmethode die konventionelle fluoreszenzbasierte Methode ohne Einbußen in der Sensitivität ersetzen kann, dabei aber deutlich kosteneffizienter arbeitet.<br />
de
dc.description.abstract
We present herein a multianalyte immunoassay for simple and low-cost quantification of C-reactive protein (CRP), Interleukin-8 (IL-8) and S-100 based on colorimetric detection using a digital camera for read-out. Glass slides coated with epoxy-polymer (SU-8), nitrocellulose and polyvinylidenefluoride (PVDF) were spotted with capture antibodies for IL-8 and S-100 and the antigen CRP. Detection and quantification of biomarkers in human serum was performed by immunoreactions with biotinylated secondary antibodies and streptavidin labeled with gold nanoparticles, alkaline phosphatase or horse radish peroxidase. The bound nanoparticles were visualized through silver staining. The read-out was fulfilled with Clondiag ArrayMate or a digital camera. Results demonstrate that the choice of chip substrate is crucial with respect to the selected detection method: non-transparent slides show higher contrast and are therefore more suitable for colorimetric detection than transparent slides. Assay sensitivity of the colorimetric assay (limits of detection: 0.01 ng/mL for S-100, 1.34 pg/mL for IL-8, 3.00 µg/mL for CRP) was similar to that of the fluorescence-based chip, indicating that the colorimetric approach can replace the conventional approach without compromise in sensitivity but being more cost-effective.<br />
en
dc.language
English
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dc.language.iso
en
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dc.rights.uri
http://rightsstatements.org/vocab/InC/1.0/
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dc.subject
Microarray
de
dc.subject
Alkaline Phosphatase
de
dc.subject
Horseradish Peroxidase
de
dc.subject
Gold Nanopartikel
de
dc.subject
Kolorimetrie
de
dc.subject
Sepsis
de
dc.subject
CRP
de
dc.subject
IL-8
de
dc.subject
S-100
de
dc.subject
Detektion
de
dc.subject
microarray
en
dc.subject
alkaline phosphatase
en
dc.subject
biochip
en
dc.subject
horseradish peroxidase
en
dc.subject
gold nanoparticles
en
dc.subject
colorimetric detection
en
dc.subject
sepsis
en
dc.subject
CRP
en
dc.subject
IL-8
en
dc.subject
S-100
en
dc.title
Development of a colorimetric protein array for the detection of sepsis
en
dc.type
Thesis
en
dc.type
Hochschulschrift
de
dc.rights.license
In Copyright
en
dc.rights.license
Urheberrechtsschutz
de
dc.contributor.affiliation
TU Wien, Österreich
-
dc.rights.holder
Heidelinde Herzog
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tuw.version
vor
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tuw.thesisinformation
Technische Universität Wien
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tuw.publication.orgunit
E164 - Institut für Chemische Technologien und Analytik