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<div class="csl-entry">Hausjell, J. (2016). <i>Mechanistic platform knowledge of concomitant sugar uptake in Escherichia coli and analysis thereof</i> [Diploma Thesis, Technische Universität Wien]. reposiTUm. https://doi.org/10.34726/hss.2016.38042</div>
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dc.identifier.uri
https://doi.org/10.34726/hss.2016.38042
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dc.identifier.uri
http://hdl.handle.net/20.500.12708/2870
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dc.description.abstract
Eines der am häufigsten angewendeten Expressionssysteme bei rekombinanter Protein-produktion in Escherichia coli ist das T7-basierte pET-Expressionssystem. Kürzlich stellten wir im Rahmen einer Studie eine neue Induktionsstrategie basierend auf Laktose vor, in der sich zeigte, dass die Laktose-Aufnahme streng von der verfügbaren Menge an Glukose abhängig ist. Darauf basierend entwickelten wir ein mechanistisches Modell zur Bestimmung der Korrelation von gleichzeitiger Zucker-Aufnahme und zeigten, dass die Bestimmung dieser Korrelation die Möglichkeit bietet, Produktivität und Produktort über die Höhe der Laktose-Aufnahme zu steuern. In dieser Studie untermauern wir die Anwendung der entdeckten Korrelation für gleichzeitige Glukose- und Laktose-Aufnahme als Plattform-Wissen für BL21(DE3) Zellen mit pET-Plasmiden: Zum ersten Mal zeigen wir, dass die Korrelation für gleichzeitige Zuckeraufnahme den gleichen Trend aufweist, in E. coli BL21(DE3) Zellen, die verschiedene Produkte exprimieren. Die absolut Werte der Laktose-Aufnahme sind jedoch unterschiedlich. Außerdem entwickelten wir eine Strategie für schnelle und verlässliche Bestimmung der Korrelation. Diese Studie kann allen Wissenschaftlern, die mit rekombinanter Proteinproduktion in E. coli Stämmen arbeiten, behilflich sein, da einerseits mechanistisches Plattform-Wissen für E. coli Stämme mit pET-Plasmiden präsentiert wird und andererseits eine Strategie zur schnellen Bestimmung der mechanistischen Korrelation vorgestellt wird.
de
dc.description.abstract
When producing recombinant proteins Escherichia coli strain BL21(DE3) in combination with the T7-based pET-expression system is often the method of choice. Recently, we proposed a new induction strategy based on lactose, where the level of lactose uptake was shown to be strictly coupled to the abundance of glucose. Based thereon we developed a mechanistic model to determine the correlation of the concomitant sugar uptake and showed that establishment of the correlation can be used to gear productivity and product location through the level of lactose uptake. In this study we substantiated applicability of the established correlation for concomitant glucose and lactose uptake as platform knowledge for BL21(DE3) cells with pET-plasmids: we show for the first time that the correlation of concomitant sugar uptake exhibits the same trend in E. coli BL21(DE3) cells expressing different products, only absolute values diverge. Furthermore, we developed a strategy for fast and accurate determination of this correlation. This study will help all scientists working with recombinant E. coli strains, as not only mechanistic platform knowledge for E. coli strains carrying the pET expression system is revealed, but also a strategy for fast determination of the mechanistic correlation is offered.
en
dc.language
English
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dc.language.iso
en
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dc.rights.uri
http://rightsstatements.org/vocab/InC/1.0/
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dc.subject
Escherichia coli BL21(DE3)
de
dc.subject
pET Expression System
de
dc.subject
Laktose Induktion
de
dc.subject
Antibody Fragment
de
dc.subject
Escherichia coli BL21(DE3)
en
dc.subject
pET expression system
en
dc.subject
Lactose induction
en
dc.subject
Antibody fragment
en
dc.subject
Dynamic experiment
en
dc.subject
Sugar uptake
en
dc.title
Mechanistic platform knowledge of concomitant sugar uptake in Escherichia coli and analysis thereof
en
dc.type
Thesis
en
dc.type
Hochschulschrift
de
dc.rights.license
In Copyright
en
dc.rights.license
Urheberrechtsschutz
de
dc.identifier.doi
10.34726/hss.2016.38042
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dc.contributor.affiliation
TU Wien, Österreich
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dc.rights.holder
Johanna Hausjell
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dc.publisher.place
Wien
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tuw.version
vor
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tuw.thesisinformation
Technische Universität Wien
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dc.contributor.assistant
Wurm, David Johannes
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tuw.publication.orgunit
E166 - Institut für Verfahrenstechnik, Umwelttechnik und Technische Biowissenschaften