Drs, E. (2004). Development of IgY - ELISAs for the detection of hidden peanut and hazelnut proteins in food [Dissertation, Technische Universität Wien]. reposiTUm. http://hdl.handle.net/20.500.12708/181008
The presence of allergenic proteins, such as peanut protein in certain food might cause adverse reactions in allergic patients. Nuts are one of a small group of food that can trigger anaphylaxis, the most severe form of allergic reaction, which is potentially life-threatening. For detection of nut proteins in food (e.g. in chocolate) rapid, sensitive and specific methods are demanded. These test formats should enable to detect low levels of soluble nut proteins, because even traces of allergenic protein can result in fatal reactions. Objective allergic symptoms occurred by ingestion of 2 mg peanut/hazelnut protein. For that purpose immunological tests are a convenient tool, as specific antigen - antibody reactions can identify special proteins from a complex matrix. Since more than one century it has been known that chicken concentrate large amounts of immunoglobulins (IgY) in there egg yolk. The isolation of antibodies from the yolk represents a remarkable alternative to the conventional antibody isolation from mammalian serum and is characterized by low affect on the animal welfare due to the immunization and by huge amounts of recovered antibodies. In addition a frequent bleeding of the animals can be omitted. Hence, at the IFA-Tulln we focused on the development of immunoassays based on egg-yolk antibodies. The production of specific antibodies against a variety of peanut/hazelnut proteins was raised in laying hens by immunization with protein extracts from roasted peanuts/hazelnuts. After the successful production of specific and sensitive antibodies immunoassays at the lower ppm (mg/kg) level were developed.
In der Gegenwart von allergenen Proteinen in Lebensmitteln können bei sensiblen Patienten ernste Reaktionen ausgelöst werden. Bei etwa 1-2% der Erwachsenen und etwa 8% der Kinder unter 3 Jahren wurden allergische Reaktionen gegen Lebensmittelbestandteile beobachtet. Oftmals genügen hierfür sogar Spuren von aufgenommenen Allergenen. Erdnuss- und Haselnussproteine gehören zu den wichtigsten Nahrungsmittelallergenen. Insbesonders als sogenannte "versteckte" Allergene, in beispielsweise kontaminierten Keksen oder Schokoladen, bergen sie ein enormes Risiko. Allergische Reaktionen könnten bereits nach dem Verzehr von nur 2mg Erdnussprotein bzw. Haselnussprotein beobachtet werden. Daher wurde in den letzten Jahren die Entwicklung von schnellen, sensitiven, robusten sowie leicht zu benutzenden Tests forciert. Immunologische Methoden wie ELISA, Dip-Sticks oder Lateral Flow Devices sind für die Detektion geringster Mengen an Protein in komplexen Matrices besonders gut geeignet. Am Analytikzentrum des IFA-Tulln wird daher seit einigen Jahren an der Entwicklung von Immunoassays auf der Basis von Eidotter Antikörper gearbeitet. Seit mehr als einem Jahrhundert ist bekannt, daß Hühner in der Lage sind, große Mengen spezifischer Immunoglobine (IgY) im Eidotter zu konzentrieren. Die Vorteile einer Antikörpergewinnung aus dem Dotter gegenüber der aus dem Serum von Säugetieren sind: (i) praktisch keine entzündlichen Reaktionen auf die bei der Immunisierung eingesetzten Adjuvantien, (ii) keine Blutabnahmen sind nötig, (iii) ernorme Mengen an Antikörpern werden im Ei konzentriert, womit mit geringem Aufwand eine Langzeitverfügbarkeit der Antikörper gewährleistet werden kann. Mittels dieser tierschonenden Methode wurden eine Vielzahl unterschiedlicher poliklonaler Antikörper gegen Erdnuss- und Haselnussproteine gewonnen. Nach affinitätschromatografischer Aufreinigung konnten sie in indirekt kompetitiven ELISA´s zur Detektion im ppm Bereich eingesetzt werden.