Kotlowski, C. (2010). Heterologous production of Aspergillus nidulans hydrophobin DewA in Trichoderma reesei [Diploma Thesis, Technische Universität Wien]. reposiTUm. http://hdl.handle.net/20.500.12708/159824
DewA wurde mit dem filamentösen Pilz Trichoderma reesei produziert, um die Ausbeute zu erhöhen und die Aufreinigung des produzierten Proteins zu erleichtern. T. reesei ist ein etablierter Produktionsorganismus und hat eine hohe Sekretionskapazität. DewA wurde unter der Regulation des hfb2 promoters produziert. Die erreichte Ausbeute im Kulturfiltrat war relativ hoch. In 2L Fermentern konnten auch relativ hohe Ausbeuten erreicht werden. Die Aktivität des Proteins DewA konnte über Beschichtungen nachgewiesen werden. Um die Ausbeute zu erhöhen, wurde DewA unter der Regulation des cbh1 promoters exprimiert. Kein DewA wurde in dem Kulturfiltrat noch in der Zellwand detektiert. Das Gen wird transkribiert. Die Transkriptionslevels sind fast so hoch, wie diejenigen der DewA produzierenden Stämme, in welchen das Gen unter der Kontrolle des hfb2 promoters exprimiert wird.
To improve the production levels of the DewA hydrophobin and to simplify the purification, this protein was produced with Trichoderma reesei as host. T. reesei is a known host and it has a high secretion capacity. DewA was first expressed under the regulation of the hfb2 promotor of T. reesei. The levels of produced DewA were relatively high both in culture filtrate and in 2L fermentation vesels. The produced DewA in the cultrue filtrate appeared to be active. To increase the yield, DewA expression was furthermore analyzed under the regulation of the cbh1 promoter of T. reesei. No DewA was detected in the culture filtrate of found to be attached to the cell wall. The gene was transcribed. The transcription levels of the dewA gene were nearly as high as in the strains which produced DewA, where the dewA gene was under the control of the hfb2 promotor.
