Synthesis of two oxandrolone long-term metabolite glucuronides

Abstract

Anabole androgene Steroide bilden noch immer die Substanzgruppe, die am häufigsten als illegale Dopingmittel in Verwendung ist. In der Anti-Doping Analytik kann die Detektion von Steroidmissbrauch herausfordernd sein, weil Steroide sehr vielfältig im menschlichen Körper metabolisiert werden. Auf der Suche nach geeigneten Marker-Molekülen sind die Langzeitmetabolite der Steroide von großer Bedeutung wegen ihres verlängerten Detektionsfensters. Hier haben besonders die konjugierten Phase II Metabolite, vor allem Glucuronide und Sulfate, in der Probenvorbereitung einen Vorteil gegenüber den Phase I Metaboliten. Sie können durch Direktmessung von Urinproben analysiert werden ohne vorhergehende Probenvorbereitung mit enzymatischer Hydrolyse. Das Ziel dieser Arbeit ist die Synthese der -D-Glucuronide von zwei C17-epimeren Oxandrolon Langzeitmetaboliten und die Bestätigung ihres Vorkommens im menschlichen Urin. Dazu werden LC-HRMS Messungen des synthetisierten Referenzmaterials verglichen mit authentischen Urinproben aus Ausscheidungsversuchen. Mit einer adaptierten analytischen Methode, die geeignet ist für die direkte Injektion von Urin, können die synthetisierten Oxandrolon Langzeitmetabolit-Glucuronide als Referenzmaterial in der Bestätigung von Oxandrolon Missbrauch verwendet werden.

Anabolic androgenic steroids are still the most prominent substance class in use as illicit doping agents. In anti-doping analysis the detection of steroid abuse can be quite challenging as steroids are extensively metabolised by the human body. In search for suitable marker molecules steroid long-term metabolites are of increasing interest due to their prolonged detection window. Their respective conjugated phase II metabolites, mostly glucuronides and sulphates, give an additional advantage over the phase I metabolites with regards to sample preparation. They can be analysed directly from urine without the need for prior sample preparation involving enzymatic hydrolysis. The aim of this work is to synthesise the -D-glucuronides of two C17-epimeric oxandrolone long-term metabolites and to verify their presence in human urine via LC-HRMS measurements by comparing the synthesised reference material to authentic urine samples obtained from excretion studies. With an analytical technique adapted for the direct injection of urine the synthesised oxandrolone long-term metabolite glucuronides can serve as reference material in the confirmation of oxandrolone abuse.